酶联免疫吸附法（ELISA）试验小常识

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一、平衡：
　　操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。

　　二、加样：
　　1、标本为血清：最好将血液先自然存放l-2小时后，再用3000rmp离心15分钟；
　　2、标本为血浆：必须使用含抗凝剂的血液标本收集管，采血后必须立即颠倒采血管混合5-10次，放置一段时间后，3000rmp离心15分钟;若在几天内检测，可放在2-8℃冰箱中，若要贮存，则置于-20℃的低温冰箱内；
　　3、加样后及时放入孵箱，加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干；
　　4、定期校验移液器，移液器与枪头要配套，移液不宜太快，排放要完全，枪头最好一次性使用；
　　5、标本较多时，应分批操作。

　　三、孵育：
　　1、贴封片或加盖；
　　2、用定时钟准确计时；
　　3、定期校验恒温箱；
　　4、在振荡器上充分混匀再放入恒温箱。

　　四、洗板：
　　1、保证洗液注满各孔，但不要溢出，洗板针畅通，洗完板后最好在吸水纸（选择干净，无或少尘的吸水材料）上轻轻拍干；
　　2、合理安排，或多用几台洗板机；
　　3、配洗液应使用纯净的蒸馏水，并防止被污染。

　　五、显色：
　　1、显色剂尽量在临用前配制，坚持不用过期显色剂，肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用；
　　2、加样时保持显色剂不外流。

　　六、终止：
　　加终止液时应避免产成气泡。

　　七、读板：
　　1、清洁酶标板；
　　2、定期校验酶标仪，TMB显色使用450nm波长。

　　八、全过程：
　　1、尽量使用移液器加液，如用滴瓶应保证滴瓶垂直向下，持力均匀，滴速不宜过快，每孔一滴；
　　2、孵育的时间和温度应严格控制，严格按说明书操作；
　　3、不同批号、不同品种的试剂组份不能交叉使用；
　　4、试剂盒应在4～8℃储存，不要长时间置于常温下或反复冻融，用剩的试剂应把瓶子盖好，板条放在密实袋内，保存在合适的环境中，尽快用完。